Использование тест-системы для определения антител к тиреопероксидазе для диагностики аутоиммунных заболеваний щитовидной железы и предрасположенности к ним

Распространенность аутоиммунных заболеваний щитовидной железы в течение последнего десятилетия имеет выраженную тенденцию к дальнейшему росту. Этому способствует влияние неблагоприятных факторов окружающей среды (последствия Чернобыльской аварии, увеличение радиоактивного фона в ряде местностей, ухудшение общей экологической обстановки, обусловливающие дисбаланс, снижение иммунных факторов организма).

Одним из наиболее хорошо известных антигенов щитовидной железы, к которым развиваются аутоиммунные реакции и вырабатываются антитела, является тиреоидная пероксидаза (ТПО). Антитела к тиреоидной пероксидазе играют существенную роль в патогенезе аутоиммунных заболеваний щитовидной железы, а определение данных антител в клинической практике значительно расширяет возможности ранней диагностики аутоиммунных заболеваний вышеуказанного органа [1, 2]. Являясь важным диагностическим критерием, тест на определение антител к ТПО позволяет также оценивать тяжесть аутоиммунных поражений щитовидной железы, эффективность проводимого лечения, возможность развития клинических нарушений в динамике заболевания [1-3]. Наиболее перспективным, с точки зрения практической значимости, чувствительности и специфичности, методом определения антител к ТПО является иммуноферментный анализ [1]. При этом существует мнение, что антитела к ТПО являются наиболее специфическими маркерами наличия аутоиммунных поражений щитовидной железы [4].

Все вышеизложенное обусловило необходимость разработки новой отечественной иммуноферментной тест-системы для определения антител к ТПО.

Целью работы явились создание и оценка диагностической значимости иммуноферментной тест-системы «Anti-ТРО-IgG», предназначенной для количественного определения антител к ТПО.

Материалы и методы исследования

При выполнении данной работы обследовано 136 пациентов с подозрением на патологию щитовидной железы. Основанием для обследования стали наличие клинических признаков гипо- или гипертиреоза и увеличение щитовидной железы. Контрольными данными служили результаты обследования 32 здоровых лиц. Кровь у обследованных забиралась утром натощак в количестве 1-2 мл. Для исследований использовалась сыворотка, полученная после центрифугирования крови в течение 10 минут при 1500 об./мин. При определении антител класса IgG к ТПО в сыворотке крови использовали иммуноферментную тест-систему «Anti-ТРО-IgG», разработанную сотрудниками ООО «Укрмедсервис» (г. Донецк) и кафедры клинической иммунологии, аллергологии и эндокринологии Донецкого государственного медицинского университета. Тест-система прошла соответствующие испытания и зарегистрирована в Украине (номер свидетельства государственной регистрации 3850/2005).

Проводимая при помощи лицензионной программы «MedStat» (г. Донецк, Украина) статистическая обработка полученного материала включала определение среднего арифметического, среднеквадратического отклонения, ошибки среднего. Для оценки достоверности различий между средними величинами использовался коэффициент Стьюдента, в том числе с поправкой Бонферрони.

Результаты и обсуждение

Проведенные исследования показали, что созданная тест-система для определения антител к ТПО соответствует требованиям, предъявляемым к иммуноферментному анализу (табл. 1). Тест-система характеризуется быстрым выполнением анализа (около 2 часов 30 минут), высокой чувствительностью и воспроизводимостью результатов (коэффициент вариации около 5%). При выполнении анализа в дублях достаточно 6 мкл сыворотки. Количественная оценка уровня антител осуществляется по калибровочной кривой в пределах от 0 до 300 МЕ/мл. Нормальными считаются уровни антител, не превышающие 30 МЕ/мл. Чувствительность тест-системы составляет 2 МЕ/мл. Необходимо указать, что отношение среднего значения оптической плотности максимального стандарта (300 МЕ/мл) к среднему значению оптической плотности минимального стандарта (0 МЕ/мл) равнялось 39,3.

В процессе изучения характеристик тест-системы было оценено влияние на полученные результаты различных температурных режимов проведения инкубаций при выполнении методики. Установлено снижение экстинции проб (Р 0,001) при инкубации их при 10°С (табл. 2). Выполнение методики при неоптимальных условиях (как при 10°С, так и при 37°С) повысило показатель вариабельности полученных результатов, однако он составил при этом менее 10%. Уровень оптической плотности и отношение ее у контрольного образца 300 МЕ к 0 МЕ составил все же больше 30 (табл. 3). Тест-система сохранила достаточную чувствительность и стабильность, несмотря на изменения температур инкубаций и снижение уровней ОП в условиях сниженной температуры, а ее характеристики вложились в требуемые нормативы (чувствительность ≤ 5МЕ/мл, вариабельность ≤ 10%).

Использование созданной тест-системы для обследования больных с клиническими и инструментальными признаками заболевания щитовидной железы позволило установить повышенный уровень антител к ТПО в 46 случаях (33,8 ± 4,1%), что значительно чаще, чем в контрольной группе (P 0,001). Так, среди здоровых лиц всего лишь у одного обследованного (3,1 ± 3,1%) были установлены значения АТ-ТПО более 30 МЕ/мл. Важно также отметить, что из 46 положительных на вышеуказанный маркер пациентов 13 лиц, что составляет 9,6% от общего количества обследованных, имели уровень антител к ТПО более 100 МЕ/мл. Выявление аутоиммунного компонента в патогенезе заболевания щитовидной железы позволяет своевременно поставить соответствующий диагноз и назначить лечебно-профилактические мероприятия [1, 4]. Кроме диагностической значимости, важно указать и на выявленную при выполнении работы прогностическую важность определения антител к ТПО. Это подтверждается результатами наблюдения за единственным представителем контрольной группы, у которого были выявлены антитела к ТПО в титре 39,4 МЕ/мл. При первом обследовании, несмотря на повышенные у него титры аутоантител, ни клинических, ни инструментальных признаков поражения щитовидной железы обнаружено не было. Исходя из вышеизложенного, за ним было установлено наблюдение. Через 6 мес. титр антител к ТПО уже составил 77,1 МЕ/мл, а через 18 мес. — 94,8 МЕ/мл. Нарастание уровня антител у данного пациента сочеталось с появлением жалоб на слабость, повышенную утомляемость. Спустя 1 год и 3 мес. после начала наблюдения было зарегистрировано увеличение щитовидной железы как по данным пальпации, так и в результате проведения УЗИ. На основании клинических, лабораторных и инструментальных признаков пациенту был поставлен диагноз аутоиммунного тиреоидита. Данный клинический пример свидетельствует о том, что повышение значения антител к ТПО может быть первым и единственным признаком дебюта аутоиммунного поражения щитовидной железы и служить важным прогностическим маркером.

Выводы

1. Разработанная тест-система «Anti-ТРО-IgG» соответствует требованиям, предъявляемым к иммуноферментному анализу: обеспечивает хорошую воспроизводимость результатов (коэффициент вариации — 3,7%), высокую чувствительность метода (2 МЕ/мл).

2. Тест-система, несмотря на различные температурные режимы проведения инкубаций (согласно методике; 10°С и 37°С), сохраняет стабильность показателей вариабельности результатов (коэффициент вариации 3,7; 8,5 и 7,2 соответственно) и чувствительности (≥ 5МЕ/мл).

3. Диагностическая ценность использования тест-системы «Anti-ТРО-IgG» подтверждается выявлением повышенных ( 30 МЕ/мл) уровней антител к ТПО в 33,8 ± 4,1% случаев среди пациентов с клиническими и инструментальными признаками поражения щитовидной железы, что значительно чаще (P 0,001), чем в контрольной группе (3,1 ± 3,1%).

4. Определение уровней антител у ТПО может служить первым признаком развития в последующем клинических проявлений аутоиммунного тиреоидита.


Источник: “http://www.mif-ua.com/archive/article/2153”

ТОП новости

Вход

Меню пользователя